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茶葉中吡蟲啉殘留量的測(cè)定檢驗(yàn)方法

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茶葉中吡蟲啉殘留量的測(cè)定檢驗(yàn)方法

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器、試劑與材料

Waters ACQUITY UPLCTM–TQD MS/MS系統(tǒng)(美國(guó)waters);高速勻質(zhì)機(jī)(德國(guó)IKA);氮吹儀(美國(guó)Organomation);離心機(jī)(日本日立);漩渦混合器(德國(guó)IKA);電子天平(FA1104,上海天平儀器廠)等。阿維菌素標(biāo)準(zhǔn)品;吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)品(95%);乙腈(色譜純);甲醇(色譜純);乙腈(分析純);固相萃取小柱:氨基炭黑柱(500mg/6mL);水為二次蒸餾水。

1.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密稱量50.0mg阿維菌素和吡蟲啉原藥于100mL棕色容量瓶中,用甲醇(色譜純)溶解并定容,配制成500mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

1.3標(biāo)準(zhǔn)曲線

取阿維菌素和吡蟲啉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,分別用甲醇稀釋配制成5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、500ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液,經(jīng)液相色譜測(cè)定后建立兩種目標(biāo)物濃度與峰面積的回歸方程。

1.4色譜質(zhì)譜條件

色譜柱:UPLC ACQUITY BEH,50×2.1mm,1.7μm;采用乙腈和0.005mol/L乙酸銨溶液梯度洗脫,洗脫程0~1min,20%A;1~4min,90%A;4~5min,100%A;5~7min,20%A。流速:0.3mL/min;柱溫:40℃;進(jìn)樣量:10μL離子源:ESI,正離子模式;毛細(xì)管電壓:4.0kV;離子源溫度:110℃;脫溶劑氣溫度350℃;脫溶劑氣流量:800L/hr;錐孔反吹氣流量50L/hr;錐孔電壓:40v;掃描方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM);離子對(duì):吡蟲啉,256/175.1(定量離子對(duì)),256/209;阿維菌素,890.5/305.2(定量離子對(duì)),890.5/567.3。

2分析步驟

2.1提取

準(zhǔn)確稱取2.5g(精確至0.01g)均勻試樣,用5mL水將試樣潤(rùn)濕,放置5min,加入5g無水硫酸鈉和15mL乙腈,渦動(dòng)3min,超聲5min,5000r/min離心5min,將上清液轉(zhuǎn)移至濃縮瓶中。用10mL乙腈再提取一次,合并提取液。將提取液于50℃水浴下用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至近干,在殘?jiān)屑尤?.0mL甲醇+二氯甲烷溶液,備用。

2.2凈化

將炭黑氨基柱用4.0mL甲醇+二氯甲烷溶液(5+95)預(yù)條件化,加入上述待凈化溶液,用10mL具塞試管收集,用2.0mL甲醇+二氯甲烷溶液(5+95)洗濃縮瓶后淋洗小柱,重復(fù)一次。將收集溶液置于50℃水浴中用氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)?.0mL乙腈溶解,在漩渦混合器上混勻,過0.2μm微孔水相濾膜后于高效液相色譜測(cè)定。

3結(jié)果與討論

3.1工作曲線

用流動(dòng)相將混合標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、500ng/mL,以峰面積為縱坐標(biāo),目標(biāo)化合物的濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。阿維菌素和吡蟲啉的相關(guān)系數(shù)分別為R=0.9991和R=0.9985,回歸方程分別為y=2632x+1033和y=8150x+229,在5ng/mL~500ng/mL范圍內(nèi),阿維菌素和吡蟲啉工作曲線線性良好,適合定量分析。

3.2液相色譜、質(zhì)譜測(cè)定條件的優(yōu)化

阿維菌素和吡蟲啉的極性較弱,在反相色譜柱上的保留較強(qiáng),因此選擇較高比例的乙腈作為強(qiáng)洗脫溶劑。母離子掃描顯示:阿維菌素和吡蟲啉在正離子模式下,目標(biāo)物檢測(cè)離子以[M+NH4]+形式存在的量較多,在流動(dòng)相中加入5mmol/L乙酸銨可促進(jìn)母離子的形成。兩種化合物的保留時(shí)間、定量離子、定性離子、錐孔電壓及碰撞能量。

3.3凈化條件的選擇

由于茶葉中色素含量較高,所以選取了可以有效吸附色素的色譜柱。結(jié)果表明,炭黑氨基柱可以很好的吸附色素和其他雜質(zhì),同時(shí),選用合適的洗脫液完全可以將兩種化合物洗脫,從而獲得較高的添加回收率。普通的氨基柱也可獲得較高的添加回收率,但由于不能吸附提取液中的色素,從而增加了對(duì)分析柱的污染及對(duì)儀器響應(yīng)的干擾,而選用堿性氧化鋁柱和C18SPE柱時(shí)不論選擇哪種淋洗劑,回收率均小于60%。所以最終選用炭黑氨基柱。淋洗液選用甲醇和二氯甲烷,對(duì)二者比例進(jìn)行了優(yōu)化,當(dāng)甲醇和二氯甲烷的比例在1∶99到5∶95之間,回收率均能滿足要求,當(dāng)甲醇和二氯甲烷的比例為5∶95時(shí),回收率達(dá)到最大值。

3.4檢出限

聯(lián)合國(guó)糧食與農(nóng)業(yè)組織(FAO)與世界衛(wèi)生組織(WHO)均未制定最高允許殘留限量,加拿大和澳大利亞規(guī)定油菜籽中最高殘留限量為0.05mg/kg。聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織(FAO)所屬的食品中農(nóng)藥殘留立法委員會(huì)(CCRPF)規(guī)定了阿維菌素的每日允許攝入量0.1μg/kg•bw,阿維菌素的最高殘留限量(MRL)為5μg/kg,美國(guó)農(nóng)業(yè)部下屬的食品安全檢驗(yàn)局(FSIS)規(guī)定的MRL值為20μg/kg,歐盟規(guī)定MRL值為0.02mg/kg。加拿大衛(wèi)生部EMRL2012-45號(hào)通報(bào),有害生物管理局修訂了吡蟲啉的最大殘留限量。將吡蟲啉在蛋、豬、馬、牛、綿羊、山羊、家禽的脂肪、肉以及肉副產(chǎn)品中的最大殘留限量修訂為0.02×10-6,將吡蟲啉在干黃豆和奶類中的最大殘留限量分別修訂。

3.5方法的準(zhǔn)確度與精確度

用上述試驗(yàn)方法,在樣品中添加不同水平的阿維菌素和吡蟲啉混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,進(jìn)行添加回收率試驗(yàn),分別進(jìn)行了5μg/kg、20μg/kg和100μg/kg三個(gè)添加水平的兩種目標(biāo)化合物的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn),每個(gè)水平重復(fù)測(cè)定6次,計(jì)算回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差,結(jié)果見表2。從表2可以看出,平均回收率范圍為81.4%~95.8%,RSD分別為2.0%~8.5%。

3.6應(yīng)用

該方法已應(yīng)用于茶葉中阿維菌素類藥物殘留的檢測(cè)。在對(duì)購(gòu)自湛江市場(chǎng)的5份綠茶、5份紅茶、5份普洱茶的檢測(cè)中,只有其中一份綠茶檢測(cè)出10.4μg/kg的吡蟲啉。

4結(jié)論

本文建立了茶葉中阿維菌素和吡蟲啉的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法。通過對(duì)提取與凈化方式進(jìn)行探討與優(yōu)化,在一定程度上減少了茶葉基體對(duì)檢測(cè)的干擾。采用電噴霧電離源,在含有乙酸銨緩沖液的流動(dòng)相條件下,以選擇信號(hào)強(qiáng)且穩(wěn)定的[M+NH4+]加合離子峰作為母離子,以基質(zhì)校正曲線進(jìn)行定量。方法穩(wěn)定、可靠、靈敏,能夠滿足國(guó)內(nèi)外法規(guī)對(duì)茶葉中阿維菌素和吡蟲啉殘留的限量要求,可用于茶葉中阿維菌素和吡蟲啉兩種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)與確證。

作者:王立一 楊春亮 王曉芳 單位:中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工研究所

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